STRATEGI KLONING DAN EKSPRESI GEN var2csa PADA SISTEM Escherichia coli SEBAGAI LANGKAH PENDAHULUAN UNTUK EKSPRESI GEN PADA SISTEM EUKARIOT TANAMAN

Sapto Nugroho Hadi, Rintis Noviyanti

Abstract


Penelitian ini bertujuan mengetahui apakah strategi yang digunakan dapat berhasil mengkloning dan
mengekspresikan sekuen DNA target (daerah DBL3x gen var2csa) pada inang E.coli. Strategi kloning dilakukan
melalui tahapan: perbanyakan sekuen DNA target melalui teknik PCR menggunakan primer yang didesain sendiri,
peligasian sekuen DNA target pada vektor kloning pCR2.1-TOPO, dan memperbanyaknya pada inang E.coli
TOP10. Strategi ekspresi dilakukan melalui tahapan: perbanyakan sekuen DNA target melalui teknik PCR
menggunakan primer yang mengandung situs pengenalan enzim restriksi endonuklease tipe II: NcoI dan XhoI,
pemotongan dengan enzim NcoI dan XhoI, peligasian pada vektor ekspresi pET-28a (+), dan pengekspresian pada
inang E. coli BL21 (DE3) dengan induser isopropyl-1-thio-ß-D-galactoside (IPTG) 1 mM. Strategi kloning
berhasil mendapatkan sekuen daerah DBL3x gen var2csa berukuran 948 pb. Strategi ekspresi berhasil
mendapatkan protein DBL3x berukuran 38 kDa.
Kata kunci: kloning, ekspresi, DBL3x, var2csa, Escherichia coli


ABSTRACT
The objective of this study is to see are the strategies approach that used successfully clone and express
DBL3x region of var2csa gene in E.coli host. The cloning strategies are amplifying DNA target through PCR
technique using self design oligonucleotide primer, inserting into cloning vector pCR2.1-TOPO, copying in
E.coli TOP10 host. The expression strategies are amplifying DNA target through PCR using self design primer
with specific site for restriction enzyme NcoI and XhoI, digesting with NcoI and XhoI, inserting into pET-28a (+)
expression vector, and expressing in E. coli BL21 (DE3) host by adding isopropyl-1-thio-ß-D-galactoside (IPTG)
1 mM as a inducer. This study successfully cloned DBL3x region of var2csa gene with 948 pb in size and
successfully expressed protein DBL3x with 38 kDa in size in E.coli system.
Keywords: cloning, expression, DBL3x, var2csa, Escherichia coli


Full Text:

PDF


DOI: http://dx.doi.org/10.20884/1.j-agrin.v19.i1.351

Refbacks

  • There are currently no refbacks.



________________________
Jurnal Agrin
Agriculture Research Journal
Faculty of Agriculture, Jenderal Soedirman University
Address :
Jl Dr.Soeparno, Karangwangkal, Purwokerto 53123
Jawa Tengah, Indonesia; Telp/Fax : +62(0281)638791
e-mail : jurnalagrin@yahoo.com , cc : ahadiyat_yugi@yahoo.com

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.